原理　　

        乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。

        维生素B

       用已知稀释度的维生素B

        测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，推荐在37°C 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。用维生素B

用于接种的测定菌应在专用的培养基中培养。

       外观——奶油色至黄色，具均匀性，倾向形成可容易分解成粉末状的软块

       制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀

       配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.1±0.2

       pH值——5.90-6.30

配置　　

        称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基完全溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的维生素B12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。

培养反应　　

进行微生物法测定维生素B

生长状况　　

        随着测定管标准品水平升高，（美国药典维生素B12标准水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。