正常人血清中IL-6的含量很低，而当患有某些疾病，如类风湿性关节炎、烧伤、肾脏移植排斥反应、败血症休克、肝炎、全身性红斑狼疮、以及某些肿瘤疾病时，体液中的IL-6水平有不同程度升高，在很多情况下与病程和病情相平行，特别是在爱滋病等疾病中，检测血液和体液中IL-6的水平可以对疾病的诊断、病情、预后及疗效进行评估。本法可用于检测正常人血清、体液、以及某些细胞培养上清中IL-6水平。

原理

用兔抗IL-6的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别结合待测标本中的IL-6，用豚鼠抗IL-6的多克隆抗体标记生物素（Bio-Ab），用亲和素标记辣根酶(HRP-A)，向固相酶标板中加入标准品或待测品，反应、洗涤后，加入Bio-Ab，反应、洗涤后，加入HRP-A反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的IL-6含量。

试剂盒组成

1.       真空包装96孔固相酶标板一块。

2.       冻干的标准品6瓶：分别用实验稀释液1mL溶解，浓度为0、0.05、0.2、0.8、1.6、3.2ng/mL。

3.       生物素化抗体（Bio-Ab）1瓶：10mL。

4.       酶稀释液 1 瓶：10mL。

5.       酶结合物1管：20µl，用前每µl加酶稀释液1mL稀释为工作液。

6.       显色液：A为冻干品：2瓶，B为液体：2瓶。 临用前1瓶A加1瓶B溶解。

7.       终止液1瓶：5mL。

8.       洗涤液1瓶：用前用蒸馏水20倍稀释。

9.       实验缓冲液 1瓶：10 mL。

注意事项

1 操作    ⑴为保证实验结果的准确性，标准品必须做双孔；条件允许的情况下标准、质控、样品均应做双孔。 ⑵为防止样品蒸发，试验时应将反应板铺于有湿布的密闭盒内。⑶血清、枸橼酸盐或EDTA抗凝血浆均可检测，但血清或血浆中残存凝块或红细胞须经离心去除。检测细胞培养上清时应同时检测培养液中IL-6含量，作为对照。⑷标本在2-8℃可贮存3天，超过3天应放入-20℃，避免反复冻融。 ⑸分别用加样器头吸取每份标本，避免相互交叉。⑹因底物易于氧化且对光敏感，因此一定要用前配置，用后的底物液必须弃去，不可再用。⑺显色时室温应在20-25℃，如果温度较低则应适当延长显色时间。

2 试剂盒储存条件    ⑴除酶结合物存于-20℃外其余试剂均储存于4℃。⑵酶标板在真空条件下可存放6个月，打开后如果不能一次用完，请装于密封性好的袋子内，于4℃干燥处保存，并在一个星期内使用。⑶标准品溶解后于4℃保存可使用一个月。⑷Bio-Ab、HRP-A每次吸取时应尽量避免污染，4℃保存可使用6个月，若液体出现浑浊则活性不可再用。

样品准备

取静脉血分离血清，待测；如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过48小时，-20℃保存不超过2个月。

操作步骤

1. ELISA测定IL-6操作步骤见下表：  加样量（µl）

操作完后用酶联仪在490nm波长测量各孔OD值。

2 计算    用酶标仪上的ELISA自动分析软件对所测OD值进行处理，选双对数法绘制曲线，直接得出样品浓度。⑵以标准物浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应浓度。

本试剂盒的技术参数

1 灵敏度：本测定法灵敏度为0.05 ng/mL。

2 精密度：用本法同时及不同时间检测，每组做8个平行样，批内变异系数5.6%，批间变异系数为10.6%。

3 准确度：⑴用回收实验验证方法的准确性，低、高样品回收率分别为105%、98%。 ⑵将IL-6含量较高的血清样品做倍比稀释测定各点的IL-6含量，结果表明测定值与稀释度之间有良好的线性关系r=0.96。

正常参考值

正常献血员血清样品44份测得正常参考值： 0.042±0.016 ng/mL。

建议各实验室应根据条件建立自己的正常对照组。