Site 1 入门科普
肺大概有40种细胞类型，上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞和间质细胞等各司其职。而从宏观角度，肺部可分为肺实质和肺间质。
肺实质由各级支气管和肺泡组成，可完成气体交换，维持机体供养，是肺部实现呼吸功能的关键部位。而肺泡更是肺部进行气体交换的关键场所，主要由Ⅰ型肺泡上皮细胞（AT1）和Ⅱ型肺泡上皮细胞（AT2） 组成。
（1）AT1 cell：进行气体交换，覆盖肺泡表面积95%，是肺泡壁的结构支持，帮助维持肺泡的形状和稳定性。
（2）AT2 cell：具有干细胞的特性，进行再生和修复受损肺组织的能力；生产和分泌肺泡表面活性物质。
肺实质结构及细胞类型[1]
肺类器官构建，则主要是气道上皮细胞（源于支气管）和肺泡上皮细胞（源于肺泡）中具有干性的细胞在体外扩增和分化来实现。在体外构建肺泡类器官，其主力细胞就是具有干细胞特性的AT2细胞。
成体细胞来源的肺类器官[1]
Site 2 培养步骤解析
组织取样
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将小鼠断颈处死并消毒，用剪刀从腹部到颈部做一个切口，暴露皮下组织。
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剪开腹部肌肉，将肝脏和肠道移开，从而暴露膈肌。
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剪开膈肌，暴露心脏和肺，并切断肾动脉。从小鼠体内取出肺，转移含D-PBS的100 mm培养皿中，分离肺的各个肺叶，并去除结缔组织。
组织消化
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用剪刀将肺叶切碎成1-2 mm3的小块。
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用防粘连润洗液（Cat.No.:NPRS）润洗1 mL吸头（剪掉尖端）后，将组织小块转移至含有2-5 mL消化液（Cat.No.:TDS2）的离心管。
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将组织置于37℃培养箱中，孵育15 min。
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用1 mL吸头将组织吹打约30次，显微镜下观察到大量游离细胞时可停止消化。（消化时长最长不超过120 min）
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加入不少于组织消化液3倍体积的含10%胎牛血清的DMEM培养基以终止消化。
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用防粘连润洗液（Cat.No.:NPRS）润洗100 μm细胞筛及离心管后，过滤细胞悬液以去掉未消化完全的组织。
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将细胞悬液300 g离心5 min，吸弃上清液。
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进行细胞计数，调整细胞密度为3-5×105/mL。
种板培养
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将细胞悬液与NovoMatrix®基质胶（Cat.No.:NMO-G-PF）在冰上按照1：4轻轻吹打混匀（混匀时间不超过30 s以避免基质胶过早凝固）
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将混合悬液接种在24孔板底部正中央，每孔40 μL左右。
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将接种后的培养板倒置于37℃恒温培养箱中，孵育15 min左右待基质胶凝固。
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每孔加入500 μL预热的小鼠肺类器官完全培养基（Cat.No.：OCMMN03），确保基质胶完全浸在培养基中。
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将24孔板置于37℃，5%CO2的恒温培养箱中培养并持续观察。接种时形态如Figure 1所示。
Figure 1 提取出的小鼠肺原代细胞
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每2天更换一次培养基，更换培养基时应避免破坏基质胶。成熟的小鼠肺类器官如Figure 2所示。
Figure 2 成熟的小鼠肺类器官 (Day 8)
类器官的传代
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吸弃原培养液，加入500 μL的细胞回收液（Cat.No.:OCRS)以确保完全浸没基质胶，2 - 8℃孵育约30 min。
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使用防粘连润洗液（Cat.No.:NPRS）润湿 1 mL 的吸头，每10 min吹打至基质胶至完全吹散，吹打过程避免产生气泡。
注意：如30 min时仍能观察到未溶解的基质胶，可适当延长10-30 min孵育时间。
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将所有悬液转移到1.5 mL离心管中并吹打10次，4℃条件下250 g离心5 min。
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小心去除上清，加入500 μL预冷的PBS重悬类器官，4℃条件下250 g离心5 min；重复此步骤1次，彻底清洗类器官。
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加入平衡至室温的小鼠肺类器官完全培养基（Cat.No.:OCMMN03），轻轻吹打重悬，按照 【种板培养】步骤进行接种培养。依据类器官的密度或状态以 1：4~ 1：6 的比例进行传代。
Figure 3 传代后的小鼠肺类器官
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Site 4 专家1v1解答
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参考文献
[1] Joe, Y. A., Lee, M. J., & Choi, H. S. (2024). Experimental Mouse Models and Human Lung Organoid Models for Studying Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Biomolecules & therapeutics, 32(6), 685–696.